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PCR試劑盒的特性與注意事項

日期:2022-07-12 19:06
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摘要:
    PCR試劑盒帶有Taq DNA Polymerase、PCR buffer、dNTP和上樣緩沖液,自備模板和引物即可進行PCR反應,適合用于普通的PCR或RT-PCR定性或定量檢測,也可以用于不太長的的DNA片段的克隆。

    Taq DNA Polymerase是一種來源于嗜熱菌Thermus aquaticus的高度熱穩定的DNA聚合酶,95℃孵育時的半衰期大于40分鐘。Taq酶的分子量為94kDa。Taq酶可以催化5'至3'方向的依賴于DNA模板的脫氧核苷酸的聚合。Taq酶沒有3'至5'的外切酶活性,有非常低的5'至3'外切酶活性。由于Taq酶沒有3'至5'的外切酶活性,因此在DNA聚合過程中相當于核苷酸轉移酶的作用,*終會導致PCR產物的3'末端會產生3'-dA overhangs,即產生帶一個A的3'粘端。本Taq DNA Polymerase為重組酶,通過大腸桿菌表達純化獲得,和純化獲得的天然Taq DNA Polymerase在各方面的性質相同。

注意事項:

    由于PCR反應非常靈敏可以擴增目的基因序列超過1000萬倍,在使用Taq酶時請注意避免微量待擴增DNA的污染,并盡量考慮設置不加模板的空白對照以確認是否有待擴增DNA的污染。

    Taq DNA polymerase在PCR過程中每循環的出錯幾率約為2.2×10-5,對于大于1kb的DNA片段的克隆推薦使用出錯幾率更低的DNA聚合酶,例如Pfu DNA polymerase、BalbTaq DNA polymerase等。對于普通的PCR或RT-PCR定性檢測或定量檢測,Taq DNA polymerase是好的選擇。

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